一、糖发酵管

成分：

牛肉膏

5g

蛋白胨

10g

氯化钠

3g

磷酸氢二钠

2g

0.2%滇麝香草酚蓝溶液

12mL

蒸馏水

mL

PH=7.4

制法：

1.葡萄糖发酵管按上述成分配好后，按0.5%加入葡萄糖，分装于有一个倒置小管的小试管内，℃高压灭菌15min。

2.其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶mL，℃高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于mL培养基内，以无菌操作分装小试管。

注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。

试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36℃±1℃培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14～30d。

二、乳糖胆盐发酵管

成分：

蛋白胨20g猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g乳糖10g0.04%滇甲酚紫水溶液25mL蒸馏水mL

制法：

将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，℃高压灭菌15min。

注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。

三、5%乳糖发酵管

成分：

蛋白胨0.2g氯化钠0.5g乳糖5g2%溴麝香草酚蓝水溶液1.2mL蒸馏水mL

pH=7.4

制法：

除乳糖以外的各成分：溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌℃15min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。

注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。

四、缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)

成分：

磷酸氢二钾5g多胨7g葡萄糖5g蒸馏水mL

制法：

溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，℃高压灭菌15min。

甲基红(MR)试验：

自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性，甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中，然后加入20mL蒸馏水。

V-P试验：

用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1℃培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养。加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL充分振摇试管，观察结果阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1℃下培养4h再进行观察。

五、营养明胶

成分：

蛋白胨5g牛肉膏3g明胶g蒸馏水mL

pH=6.8～7.0

制法：

加热溶解，校正至pH7.4～7.6，分装小管，℃高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固，复查最终pH应为6.8～7.0。

试验方法：用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25℃培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1℃培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。

六、苯丙氨酸培养基

成分：

酵母浸膏3gDI-苯丙氨酸(L-苯丙氨酸)2g(1g)磷酸氢二钠1g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水mL

制法：

加热溶解后分装试管，℃高压灭菌15min，使成斜面。

试验方法：

自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36士1℃培养4h或18～24h，滴加10%三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。

七、蛋白胨水(靛基质试验用)

成分：

蛋白胨(或胰蛋白胨)20g氯化钠5g蒸馏水mL

pH=7.4

制法：

按上述成分配制，分装小试管，℃高压灭菌15min。

靛基质试剂

①柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25ml。

②欧-波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内，然后缓慢加入浓盐酸20ml。试验方法：挑取小量培养物接种，在36士1℃培养1～2d，必要时可培养4～5d。加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0.5mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。

注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。

八、硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)

成分：

牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水ml

制法：

加热溶解，校正pH，分装试管，℃高压灭菌15min，取出直立候其凝固。

试验方法：

挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36士1℃培养1～2d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。

注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。

九、尿素琼脂

成分：

蛋白胨1g氯化钠5g葡萄糖1g磷酸二氢钾2g4%酚红溶液3ml琼脂20g蒸馏水ml20%尿素溶液mL

制法：

将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。℃高压灭菌15min。冷至50～55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2%，最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内，放成斜面备用。

试验方法：

挑取琼脂培养物接种，在36士1℃培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。

十、氰化钾(KCN)培养基

成分：

蛋白胨10g氯化钠5g磷酸二氢钾0.g磷酸氢二钠5.64g蒸馏水ml0.5%氰化钾溶液20ml

pH=7.6

制法：

将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，℃高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1:0)，分装于12mm×mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4℃冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。

十一、营养琼脂

成分：

蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15～20g蒸馏水mL

制法：

将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化分装烧瓶，℃高压灭菌15min。

注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。

十二、营养肉汤

成分：

蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g蒸馏水mL

pH=7.4

制法：

按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶mL，℃高压灭菌15min。

十三、缓冲蛋白胨水(BP)

成分：

蛋白胨10g氯化钠5g磷酸氢二钠9g磷酸二氢钾1.5g蒸馏水mL

pH=7.2

制法：

按上述成分配好后以大烧瓶装，℃高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶mL。

注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。

十四、EC肉汤

成分：

胰蛋白胨20g3号胆盐(或混合胆盐)1.5g乳糖5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾1.5g氯化钠5g蒸馏水mL

制法：

将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，℃高压灭菌15min。最终pH为6.9±0.2。

十五、四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)

基础培养基

多胨或眎胨5g胆盐1g碳酸钙10g硫代硫酸钠3g蒸馏水mL

碘溶液

碘6g碘化钾5g蒸馏水20ml

制法：

将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶mL。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀，℃高压灭菌15min备用。临用时每mL基础培养基中加入碘溶液2mL，0.1%煌绿溶液1mL。

蛋白胨

5g

乳糖4g亚硒酸氢钠4g磷酸氢二钠5.5g磷酸二氢钾4.5gL-胱氨酸0.01g蒸馏水mL

1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法：称取L-胱氨酸0.1g或(DL-胱氨酸0.2g)，加1mol/L氢氧化钠1.5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。

制法：

将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL。

分装于灭菌瓶中．每瓶mL，pH应为7.0±0.1。

十七、亚硫酸铋琼脂(BS)

成分：

蛋白胨10g牛肉膏5g葡萄糖5g硫酸亚铁0.3g磷酸氢二钠4g煌绿0.g柠檬酸铋铵2g亚硫酸钠6g琼脂18～20g蒸馏水mL

pH=7.5

制法：

1、将前面5种成分溶解于mL蒸馏水中。

2、将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。

3、将琼脂于mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80℃。

4、将以上三液合并，补充蒸馏水至mL，校正pH，加0.5%煌绿水溶液5mL，摇匀，冷至50～55℃，倾注平皿。

注：此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处，超过48h不宜使用。

十八、三糖铁琼脂(TSI)

成分：

蛋白胨20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁铵0.2g硫代硫酸钠0.2g琼脂12g酚红0.g蒸馏水ml

pH=7.4

制法：

将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀，分装试管。装量宜多些，以便得到较高的底层。℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。

十九、三糖铁琼脂换用方法

成分：

蛋白胨15g眎胨5g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g琼脂12g酚红0.g蒸馏水ml

pH=7.4

制法：

将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5mL，摇匀，分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。℃高压灭菌15min，放置高层斜面备用。

二十、嗜盐性试验培养基

成分：

蛋白胨2g氯化钠按不同量加蒸馏水ml

pH=7.7

制法：

配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠：(1)不加；(2)3g；(3)7g；(4)9g；(5)11g。待溶解后分装试管，℃高压灭菌15min。

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