是一群不发酵或仅氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性无芽胞杆菌。包括13个属。主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。大多为条件致病菌。 　　根据氧化酶、0-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。1.培养温度　多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。有的更适宜生长于室温（18～22℃）。故常规标本应先培养于35～37℃，再培养于30℃或室温。

2.动力与鞭毛　在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。有时需借助鞭毛染色予以鉴定。3.氧化酶试验　该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。

4.氧化-发酵（O-F）试验　是确定非发酵菌基本试验。非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。Hugh-Leifson设计的O-F培养基只含0.2%蛋白胨，1%的糖和指示剂溴麝香革酚蓝。检测时接种细菌于2管O-F培养基，在一管培养基的表面加盖无菌液状石蜡（称闭管），另一管则不加（称开管）。经培养后，开管产酸，闭管不变，表示细菌氧化利用糖类；如开管和闭管都产酸，表示细菌都发酵分解糖类；若两管都无变化，表示细菌不能利用糖类。根据细菌在此培养基中生长情况与结果，可区别细菌为氧化型或发酵型。

5.在麦康凯琼脂上生长情况　如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。 　　非发酵菌主要菌属的基本特征

菌属

葡萄糖（O/F）

氧化酶

悬滴动力

鞭毛

触酶

硝酸盐还原

麦康凯培养基生长

假单胞菌属

O/－

+

+

端鞭毛

+

+/-

+

不动杆菌属

O/－

－

－

无

+

－

+

产碱杆菌属

－

+

+

周毛

+

+/－

+

莫拉菌属

－

+

-

无

+

+/－

－

艾肯菌属

－

+

－

无

－

+

－

一、假单胞菌属 　　假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。本属细菌种类很多，达余种，其中与临床相关的代表种为31种。多数为腐生菌，少数为植物和动物的寄生菌，有的为条件致病菌。在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。 　　本属菌为无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌。多有极端鞭毛或丛鞭毛，为专性需氧菌。最适温度为30～37℃，营养要求不高，能在普通琼脂上生长。许多菌株能产生水溶性色素和多种胞外酶。

　　铜绿假单胞菌 　　铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种，俗称绿脓杆菌。是医院感染的主要病原体之一。1.生物学特性 　　（1）形态与染色：本菌为细长革兰阴性杆菌，无芽胞，无荚膜。有1～3根鞭毛，运动活泼。 　　（2）培养特性：为专性需氧菌，最适温度为35℃，在4℃不生长，此点可与荧光假单胞菌区别。 　　在普通琼脂平板培养基上，经18～24h培养，可形成圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑、湿润且常呈融合状态的菌落。

　　在血液琼脂平板上经18～24h培养，可形成扁平、湿润、有特殊气味的灰绿色或蓝绿色菌落，菌落周围有透明溶血环。从痰液中分离的菌落有些为黏液型，无色素。 　　在选择培养基上，如麦康凯琼脂培养基上，经18～24h培养，可形成微小无光泽半透明菌落，48h菌落中心常呈棕绿色。在SS琼脂培养基上可形成类似沙门菌的菌落，稍久菌落可呈棕绿色。 　　在肉汤中培养，液面可形成菌膜，细菌在深层发育不良，呈微混浊或透明状，菌液上层为蓝绿色。 　　铜绿假单胞菌产生的主要色素包括：①绿脓素，为蓝绿色，可溶于水和氯仿，无荧光性；②荧光素为绿色荧光素，溶于水而不溶于氯仿。本菌产生绿脓素的菌株约75.5%，产生荧光素的菌株约89.9%。 　　（3）生化反应：氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖、木糖，产酸不产气。本菌能利用枸橼酸盐，不产生吲哚，不产生H2S，能液化明胶，分解尿素，还原硝酸盐并产生N2。

2.致病性　铜绿假单胞菌引起的局部感染常见于烧伤或创伤后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心内膜炎、肺炎，严重者可引起败血症，死亡率甚高。3.耐药性　具有多重耐药，主要是微孔蛋白的突变，可阻止抗生素由外膜进入胞质。初代敏感的菌株在治疗3～4d后可能发生耐药。亚胺培南耐药主要原因之一是产生金属酶。

4.微生物检验 　　（1）标本采集：根据病情可采集相应的临床标本。 　　（2）检验方法及鉴定1）直接涂片镜检：绿色脓汁，分泌物可直接涂片，脑脊液、胸、腹水可直接或离心后取其沉淀物涂片，染色并镜检。2）分离培养：血液及体液标本可先增菌后再转种血琼脂和麦康凯琼脂，脓液、分泌物、中段尿等可直接接种上述培养基分离培养。3）初步鉴定：可依据菌落特征、色素（约10%菌株不产生色素）、气味等以及涂片染色结果，氧化酶试验。4）最后鉴定：铜绿假单胞菌的最后鉴定仍主要依据生化反应特征，借此与其他假单胞菌相鉴别。对于不产生色素的铜绿假单胞菌若硝酸盐还原试验、明胶液化、精氨酸双水解酶以及0.2%硫酸铜营养琼脂生长试验均为阳性时仍提示本菌的可能。

二、嗜麦芽窄食单胞菌 　　分类上属于窄食单胞菌属，端鞭毛1～8根，有动力、无芽胞、无荚膜，菌落不溶血，有黄色素。专性需氧菌，氧化酶阴性，可水解七叶苷，液化明胶，DNA酶阳性并可使赖氨酸脱羧。能氧化分解葡萄糖和麦芽糖，且分解麦芽糖比分解葡萄糖迅速而明显，故名嗜麦芽窄食单胞菌。

三、不动杆菌属 　　菌体为球杆状，并成对排列，可单个存在，无芽胞、无鞭毛、专性需氧菌。其生物学特征为“三阴”，即氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阴性和动力阴性。临床重要的不动杆菌属细菌为醋酸钙不动杆菌、鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌。

四、产碱杆菌属1.生物学性状　革兰阴性短杆菌，有时呈弧状，单个、成对或链状排列，无芽胞，多数菌株无荚膜，本菌属菌为周毛菌。在液体培养基中表面可形成菌膜，在含有蛋白胨的肉汤中产氨，使pH上升可至8.6。本菌属菌氧化酶、触酶均阳性，不分解糖类，O/F培养基中呈碱性反应，不分解尿素，不产生硫化氢，不形成吲哚，不液化明胶。2.微生物检验　采取临床标本如血液、尿液、穿刺液、痰、脓汁等，血液、穿刺液可先行增菌培养，然后接种，其他标本可接种血琼脂平板、麦康凯琼脂。根据染色、培养特点，及氧化酶试验结果，进一步作生化反应予以鉴定。3.临床意义　广泛存在于自然界，亦存在于人和动物肠道及皮肤上，形成正常菌群，本菌属细菌为条件致病菌，医院感染。4.治疗原则　根据体外药敏试验结果，选用对该菌敏感的抗生素进行治疗。

五、军团菌属1.命名和分类年在美国费城召开的全美退伍军人会议期间，暴发流行一种严重肺炎，年美国疾病控制中心将其命名为军团菌。《伯杰系统细菌学手册》（）定为军团菌科，军团菌属。主要致病菌为嗜肺军团菌。2.生物学性状：革兰阴性杆菌，有端生或侧生鞭毛。无芽胞、无荚膜。属需氧菌，在含有2.5%-5%C02环境中生长良好。营养要求较苛刻，且生长缓慢。本属细菌触酶阳性，部分菌株氧化酶阳性，不分解糖类，多数菌株产β-内酰胺酶。本菌在自然界广泛存在，人工管道的水源中常存在此菌，如医院空调冷却水中常有此菌。

3.微生物检验：胸水和下呼吸道分泌物，可以直接接种于活性炭-酵母浸出液琼脂。血液标本可接种于双相培养基。将分离培养后的菌落进行革兰染色镜检，进行氧化酶和触酶试验，明胶液化试验及内酰胺酶试验。也可利用PCR技术及荧光抗体染色进行鉴定。由于该菌培养难度相对较大，故临床上常检测军团菌抗体IgG、IgM。但军团菌的血清学反应与其他一些细菌，如假单胞菌属等有交叉反应，应引起注意。 　　临床意义军团菌可引起军团菌病，主要由嗜肺军团菌，轻症型类似流感，患者有发热、头痛、无力等症状。重症型是以肺部感染为主要特征，常导致多器官损害，最终导致呼吸衰竭死亡。 　　六、黄杆菌属黄杆菌属为一群无动力、无芽胞、无荚膜，革兰阴性杆菌。氧化酶、触酶、磷酸酶阳性，血平板上生长良好，典型菌落呈淡黄色，黄色或棕黄色。芳香黄杆菌、脑膜炎败血性黄杆菌较常见。治疗：选用磺胺、红霉素。 　　七、莫拉菌属本菌属可从人类或温血动物体内检出。是导致中耳炎、鼻窦炎、支气管炎和肺炎的病原体。 　　革兰阴性杆菌，具有多形性。本菌营养要求较高，最适生长温度为32～35℃。氧化酶阳性，触酶阳性，无动力，不分解任何糖类，吲哚试验阴性。

　　 　　下列细菌中繁殖速度最慢的是 　　A.大肠埃希菌 　　B.丙型链球菌 　　C.脑膜炎奈氏菌 　　D.结核分枝杆菌 　　E.肺炎链球菌

『正确答案』D『答案解析』结核分枝杆菌生长缓慢，最快的分裂速度为18h一代。在固体培养基上，一般需2～6周才能长出菌落。

　　与结核分枝杆菌抗酸性有关的成分是 　　A.索状因子 　　B.磷脂 　　C.分枝菌酸 　　D.腊质D 　　E.硫酸脑苷脂

『正确答案』C『答案解析』与结核分枝杆菌抗酸性有关的成分是分枝菌酸。耐受酸和抗酒精，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗3%盐酸酒精的脱色作用，故又称抗酸杆菌。

　　与结核分枝杆菌毒力无关的是 　　A.磷脂 　　B.硫酸脑苷脂 　　C.索状因子 　　D.腊质D 　　E.内毒素

『正确答案』E『答案解析』结核分枝杆菌无内外毒素，其致病性与菌体某些成分如索状因子、蜡质D及分枝菌酸有关。

　　从痰中检出具有临床诊断意义的细菌是 　　A.表皮葡萄球菌 　　B.金黄色葡萄球菌 　　C.结核分枝杆菌 　　D.脑膜炎奈氏菌 　　E.甲型溶血性链球菌

『正确答案』C『答案解析』从痰中检出具有临床诊断意义的细菌是结核分枝杆菌。

　　尚未人工培养成功的细菌是 　　A.结核分枝杆菌 　　B.麻风分枝杆菌 　　C.布鲁菌 　　D.艰难梭菌 　　E.鼠疫杆菌

『正确答案』B『答案解析』麻风分枝杆菌是麻风的病原菌，麻风是一种慢性传染病，早期主要损害皮肤、黏膜和神经末梢，晚期可侵犯深部组织和器官，此菌尚未人工培养成功，已用犰狳建立良好的动物模型。

　　培养结核分枝杆菌常用培养基是 　　A.鲍金培养基 　　B.疱肉培养基 　　C.罗氏培养基 　　D.巧克力培养基 　　E.亚碲酸钾培养基

『正确答案』C『答案解析』结核分枝杆菌的分离培养对于结核病的诊断、疗效观察及抗结核药物的研究均具有重要意义。培养前针对标本应做适当的前处理，如痰可做4%H2SO4或4%NaOH处理20～30min，除去杂菌再接种予罗氏培养基，37℃培养，定时观察，至4～8周。此方法可准确诊断结核杆菌。

　　抗酸染色结核分枝杆菌“2+”，细菌数量为 　　A.每个视野1～9条 　　B.10个视野1～9条 　　C.10个视野10～99条 　　D.每个视野10～99条 　　E.个视野1～9条

『正确答案』B『答案解析』全视野（或个视野）未找到抗酸菌；+：全视野发现3～9个；++：全视野发现10～99个；+++：每视野发现1～9个；++++：每视野发现10个以上（全视野发现1～2个时报告抗酸菌的个数）。

　　结核菌素试验的原理 　　A.Ⅰ型超敏反应 　　B.Ⅱ型超敏反应 　　C.Ⅲ型超敏反应 　　D.Ⅳ型超敏反应 　　E.Ⅴ型超敏反应

『正确答案』D『答案解析』利用Ⅳ型变态反应的原理，检测机体是否感染过结核杆菌。

　　能产生绿色色素和生姜样气味的细菌是 　　A.志贺菌 　　B.变形杆菌 　　C.克雷伯菌 　　D.枸橼酸杆菌 　　E.铜绿假单胞菌

『正确答案』E『答案解析』能产生绿色色素和生姜样气味的细菌是铜绿假单胞菌。

　　不动杆菌的特性中，错误的是 　　A.氧化酶阴性 　　B.触酶阳性 　　C.不发酵糖类 　　D.有动力 　　E.分布广泛

『正确答案』D『答案解析』不动杆菌体为球杆状，并成对排列，可单个存在，无芽胞、无鞭毛、专性需氧菌。其生物学特征为“三阴”，即氧化酶阴性，硝酸盐还原试验阴性和动力阴性。

　　对绿脓杆菌特征的错误叙述是 　　A.菌体一端有鞭毛 　　B.氧化酶试验阳性 　　C.可产生脂溶性色素 　　D.对多种抗生素耐药 　　E.通过接触引起医源性传播

『正确答案』C『答案解析』铜绿假单胞菌产生的主要色素包括：①绿脓素，为蓝绿色，可溶于水和氯仿，无荧光性；②荧光素为绿色荧光素，溶于水而不溶于氯仿。本菌产生绿脓素的菌株约75.5%，产生荧光素的菌株约89.9%。

　　目前麻风病的微生物学诊断方法主要依靠 　　A.在鼻黏膜或皮损处取材，抗酸染色方法检查 　　B.麻风菌素试验 　　C.测血清中麻风杆菌特异性抗体 　　D.分离培养 　　E.动物实验

『正确答案』A『答案解析』麻风分枝杆菌亦为抗酸杆菌，但较结核杆菌短而粗。抗酸染色着色均匀，呈束状或团状排列。为典型的胞内寄生菌，该菌所在的细胞胞质呈泡沫状，称麻风细胞。麻风分枝杆菌是麻风的病原菌，麻风是一种慢性传染病，早期主要损害皮肤、黏膜和神经末梢，晚期可侵犯深部组织和器官，此菌尚未人工培养成功，已用犰狳建立良好的动物模型。

　　军团菌感染后，不易采集哪种标本进行微生物学检查 　　A.痰 　　B.肺泡盥洗液 　　C.粪便 　　D.活检肺组织 　　E.血

『正确答案』C『答案解析』合理采取相应标本，如下呼吸道分泌物、胸水、活检肺组织及血液等。

　　不发酵菌是指不发酵下述哪种糖 　　A.葡萄糖 　　B.乳糖 　　C.麦芽糖 　　D.甘露醇 　　E.蔗糖

『正确答案』A『答案解析』非发酵菌主要是指一群不发酵或仅氧化形式利用葡萄糖的革兰阴性无芽胞需氧或兼性厌氧杆菌。

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