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前言

临床微生物检验过程中，有很多培养基，你是否还在因为买了一批用不完过期而烦恼呢？现在就告诉大家一下配方，我们随时用随时配，方便、节约成本。你要觉得有用，赶紧转走吧。

目录

01糖发酵管02ONPG培养基03西蒙氏柠檬酸盐培养基04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)05克氏柠檬酸盐培养基06丙二酸钠培养基07葡葡糖铵培养基08Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)09马尿酸钠培养基10营养明胶11苯丙氨酸培养基12氨基酸脱羧酶试验培养基13蛋白胨水(靛基质试验用)14硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)15尿素琼脂16氰化钾(KCN)培养基17氧化酶试验18硝酸盐培养基19细胞色素氧化酶试验20过氧化氢酶试验21过氧化物酶试验22磷酸盐缓冲液23明胶磷酸盐缓冲液24乳酸-苯酚溶液25肉浸液肉汤26肉浸液琼脂27牛肉(或牛心)消化汤28血消化汤29豆粉琼脂30血琼脂31营养琼脂32营养肉汤33乳糖胆盐发酵管34乳糖发酵管35EC肉汤36缓冲蛋白胨水(BP)37氯化镁孔雀绿增菌液(MM)38四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)39四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)40亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)41GN增菌液42肠道菌增菌肉汤43亚硫酸铋琼脂(BS)44DHL琼脂45HE琼脂46SS琼脂47WS琼脂48麦康凯琼脂49伊红美蓝琼脂(EMB)50三糖铁琼脂(TSI)51三糖铁琼脂(换用方法)52克氏双糖铁琼脂(KI)53克氏双糖铁琼脂(换用方法)54葡萄糖半固体发酵管%乳糖发酵管56CAYE培养基57Honda氏产毒肉汤58Elek氏培养基(毒素测定用)59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60胰蛋白胨水61Rustigian氏尿素培养液62氯化钠结晶紫增菌液63氯化钠蔗糖琼脂64嗜盐菌选择性琼脂.5%氯化钠三糖铁琼脂66氯化钠血琼脂.5%氯化钠生化试验培养基68改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)69CIN-1培养基70嗜盐性试验培养基

01糖发酵管成分:牛肉膏5g蛋白胨10g氯化钠3g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水mLpH7.4制法:1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,℃高压灭菌15min.2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶mL,℃高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于mL培养基内,以无菌操作分装小试管.注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于36℃±1℃培养,一般观察2～3d.迟缓反应需观察14～30d.

02ONPG培养基成分:邻硝基酚β-D-半乳糖昔(ONPG)60mg(O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside)0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5)10mL1%蛋白胨水(PH7.5)30mL制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm×75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于36±1℃培养1～3h和24h观察结果.如果β-半乳糖苷酶产生,则于1～3h变黄色,如无此酶则24h不变色.

03西蒙氏柠檬酸盐培养基成分:氯化钠5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g柠檬酸钠5g琼脂20g蒸馏水mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mLpH6.8制法:先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,℃高压灭菌15min.放成斜面.试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于36±1℃培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色.

04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)成分:磷酸氢二钾5g多胨7g葡萄糖5g蒸馏水mLpH7.0制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,℃高压灭菌15min.甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2～5d,哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水.V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于36±1℃培养2～4d.哈夫尼亚菌则应在22～25℃培养.加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36±1℃下培养4h再进行观察.

05克氏柠檬酸盐培养基成分:柠檬酸钠3g葡萄糖0.2g酵母浸膏0.5g单盐酸半胱氨酸0.1g磷酸二氢钾1g氯化钠5g0.2%酚红溶液6mL琼脂15g蒸馏水mL制法:加热溶解,分装试管,℃高压灭菌15min.放成斜面.试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在36±1℃培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.

06丙二酸钠培养基成分:酵母浸膏1g硫酸铵2g磷酸氢二钾0.6g磷酸二氢钾0.4g氯化钠2g丙二酸钠3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水mLpH6.8制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,℃高压灭菌15min.试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于36±1℃培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.

07葡葡糖铵培养基成分:氯化钠5g硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.2g磷酸二氢铵1g磷酸氢二钾1g葡萄糖2g琼脂20g蒸馏水mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液40mLpH6.8制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,℃高压灭菌15min,放成斜面.试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20～之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于36±1℃培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.

08Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)成分:蛋白胨2g氯化钠5g磷酸氢二钾0.3g琼脂4g葡萄糖10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,℃高压灭菌15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于36±1℃培养.

09马尿酸钠培养基成分:马尿酸钠1g肉浸液mL制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌℃20min.试剂:三氯化铁(FeCl3·6H2O)12g,溶于2%盐酸溶液mL中即成.试验方法:用纯培养物接种,于42℃培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经10～15min,观察结果.结果:出现恒久之沉淀物为阳性.

10营养明胶成分:蛋白胨5g牛肉膏3g明胶g蒸馏水mLpH6.8～7.0制法:加热溶解,校正至pH7.4～7.6,分装小管,℃高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH应为6.8～7.0.试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在22～25℃培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1℃培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果.

11苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏3gDI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g)2g磷酸氢二钠1g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水mL制法:加热溶解后分装试管,℃高压灭菌15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培养4h或18～24h.滴加10%三氯化铁溶液2～3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.

12氨基酸脱羧酶试验培养基成分:蛋白胨5g酵母浸膏3g葡萄糖1g蒸馏水mL1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液1mLL-氨基酸或DL-氨基酸0.5或1g/mLpH6.8制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,℃高压灭菌10min.试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±1℃培养18～24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色.

13蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨)20g氯化钠5g蒸馏水mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,℃高压灭菌15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1～2d,必要时可培养4～5d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用.

14硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水mLpH7.4制法:加热溶解,校正pH,分装试管,℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固.试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±1℃培养1～2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基.

15尿素琼脂成分:蛋白胨1g氯化钠5g葡萄糖1g磷酸二氢钾2g0.4%酚红溶液3mL琼脂20g蒸馏水mL20%尿素溶液mLpH7.2±0.1制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶.℃高压灭菌15min.冷至50～55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液.尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内,放成斜面备用.试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果.尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色.16氰化钾(KCN)培养基成分:蛋白胨10g氯化钠5g磷酸二氢钾0.g磷酸氢二钠5.64g蒸馏水mL0.5%氰化钾溶液20mLpH7.6制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,℃高压灭菌15min.放在冰箱内使其充分冷却.每mL培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0mL(最后浓度为1:0),分装于12mm×mm灭菌试管,每管约4mL,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月.同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用.

17氧化酶试验试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液:少量新鲜配制,干冰箱内避光保存.1%α-萘酚-乙醇溶液.试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落.加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色.阴性于两分钟内不变色.以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同.

18硝酸盐培养基成分:硝酸钾0.2g蛋白5g蒸馏水mLpH7.4制法:溶解,校正pH,分装试管,每管约5mL,℃高压灭菌15min.硝酸盐还原试剂:甲液:将对氨基苯磺酸0.8g溶解于2.5mol/L乙酸溶液mL中.乙液:将甲萘胺0.5g溶解于2.5mol/L乙酸溶液mL中.试验方法:接种后在36±1℃培养1～4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果.硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色.注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长.如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色.

19细胞色素氧化酶试验试剂:1%盐酸二甲基对苯二胺溶液.1%α-萘酚-乙醇溶液.试验方法:取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2～3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物.如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上.结果:于2min内呈现蓝色者为阳性.阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果.

20过氧化氢酶试验试剂:3%过氧化氢溶液:临用时配制.试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2mL,观察结果.结果:于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性.

21过氧化物酶试验试剂:2%儿茶酚溶液.3%过氧化氢溶液.试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加2%儿茶酚溶液1mL及3%过氧化氢溶液1mL.静置于室温(20℃)中30～60min,观察结果.结果:阳性反应,细菌变为黑褐色;阴性反应,细菌不变色.注:过氧化物酶的作用可受氰化钾的抑制.

22磷酸盐缓冲液储存液磷酸二氢钾34g1mol/L氢氧化钠溶液mL蒸馏水mLpH7.2制法:先将磷酸盐溶解于mL蒸馏水中,用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH后,再用蒸馏水稀释至mL.稀释液:取储存液1.25mL,用蒸馏水稀释至mL.分装每瓶mL或每管10mL,℃高压灭菌15min.

23明胶磷酸盐缓冲液成分:明胶2g磷酸氢二钠4g蒸馏水mLpH6.2制法:加热溶解,校正pH,℃高压灭菌15min.

24乳酸-苯酚溶液成分:苯酚10g乳酸(比重1.21)10g甘油20g蒸馏水10mL制法:将苯酚在水中加热溶解,然后加入乳酸及甘油.用途:检验真菌形态时用.

25肉浸液肉汤成分:绞碎牛肉g氯化钠5g蛋白胨10g磷酸氢二钾2g蒸馏水mL制法:将绞碎之去筋膜无油脂牛肉g加蒸馏水mL,混合后放冰箱过夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小时,使肉渣完全凝结成块,用绒布过滤,并挤压收集全部滤液,加水补足原量.加入蛋白胨,氯化钠和磷酸盐,溶解后校正pH7.4～7.6煮沸并过滤,分装烧瓶,℃高压灭菌30min.

26肉浸液琼脂成分:肉浸液肉汤(PH7.4)mL琼脂17～20g制法:加热溶化琼脂,分装烧瓶或试管,℃高压灭菌30min.根据需要,倾注平板或放成斜面.

27牛肉(或牛心)消化汤成分:绞碎牛肉(或牛心)g15%氢氧化钠溶液27mL胰蛋白酶40mL三氯甲烷1mL氯化钠10g蒸馏水mL制法:1称取碎牛肉,加蒸馏水,隔水加热到80℃,维持15min.2加氢氧化钠溶液,对pH试纸呈弱碱性,冷至40℃.3加胰蛋白酶,氯仿,在36±1℃放置4～5h,每小时摇动一二次.44h后,吸取上层液5mL于试管中,加5%硫酸铜溶液0.1mL,4%氢氧化钠溶液5mL,混合之.若呈红色,则不须再消化,可由温箱取出.5加入15%乙酸溶液45mL,对pH试纸呈酸性.6煮沸15min,使胰蛋白酶破坏,冷后,放冰箱内一夜.7次日吸取上层清液,加氯化钠10g,并加水补足原量,煮沸.8校正pH7.4～7.6(加15%氢氧化钠溶液约10mL),加热,用滤纸过滤,分装烧瓶,℃高压灭菌20min.注:①此培养基可作为琼脂培养基的基础,不需加蛋白胨.②胰蛋白酶之配制:称取去脂绞碎的猪胰g,加入乙醇mL,蒸馏水1mL,混合之,装人玻塞瓶内.每日摇匀三次.3d后,用绒布过滤挤出其汁,加盐酸至0.05%,放冰箱内保存备用.

28血消化汤成分:绞碎猪胃g绞碎猪血块g蒸馏水mL浓盐酸10mL制法:1洗涤猪胃,除去油脂,保留胃粘膜,用绞肉机绞碎.2用绞肉机将猪血块绞碎.3将蒸馏水加热至55℃,加入猪胃,猪血块和盐酸,置55℃水浴中24h,时常加以摇动.4从水浴内取出,加入1moL/L碳酸钠溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱内一夜.5吸取上层清液,加磷酸氢二钾1g,加热至75℃,加入1mol/L碳酸钠溶液45mL,煮沸,校正pH7.2～7.4.6用滤纸过滤,分装烧瓶,℃高压灭菌20min.

29豆粉琼脂成分:牛心消化汤(PH7.4～7.6)mL琼脂20g黄豆粉浸液50mL制法:将琼脂加在牛心消化汤内,加热溶解,过滤.加入豌豆粉浸液,分装每瓶mL,℃高压灭菌15min.豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g,氯化钠10g,加入蒸馏水mL.置℃水浴内加热1h,放于冰箱中过夜.吸取上清液即为豌豆浸液.

30血琼脂成分:pH7.4～7.6豆粉琼脂mL脱纤维羊血(或兔血)5～10mL制法:加热溶化琼脂,冷至50℃,以灭菌手续加入脱纤维羊血,摇匀,倾注平板.亦可分装灭菌试管,置成斜面.亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂.

31营养琼脂成分:蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂15～20g蒸馏水mL制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内,加入15%氢氧化钠溶液约2mL,校正pH至7.2～7.4.加入琼脂,加热煮沸,使琼脂溶化.分装烧瓶,℃高压灭菌15min.注:此培养基可供一般细菌培养之用,可倾注平板或制成斜面.如用于菌落计数,琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面,则应为2%.

32营养肉汤成分:蛋白陈10g牛肉膏3g氯化钠5g蒸馏水mLpH7.4制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分装烧瓶,每瓶mL,℃高压灭菌15min.

33乳糖胆盐发酵管成分:蛋白胨20g猪胆盐(或牛,羊胆盐)5g乳糖10g0.04%滇甲酚紫水溶液25mL蒸馏水mLpH7.4制法:将蛋白胨,胆盐及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,分装每管10mL,并放入一个小倒管,℃高压灭菌15min.注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.

34乳糖发酵管成分:蛋白胨20g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液25mL蒸馏水mLpH7.4制法:将蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示剂,按检验要求分装30mL,10mL或3mL,并放入一个小倒管,℃高压灭菌15min.注:①双料乳糖发酵管除蒸馏水外,其他成分加倍.②30mL和10mL乳糖发酵管专供酱油及酱类检验用,3mL乳糖发酵管供大肠菌群证实试验用.

35EC肉汤成分:胰蛋白胨20g3号胆盐(或混合胆盐)1.5g乳糖5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾1.5g氯化钠5g蒸馏水mL制法:将上述成分混合,溶解后,分装有发酵倒管的试管中,℃高压灭菌15min,最终pH为6.9±0.2.

36缓冲蛋白胨水(BP)成分:蛋白胨10g氯化钠5g磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)9g磷酸二氢钾1.5g蒸馏水mLpH7.2制法:按上述成分配好后以大烧瓶装,℃高压灭菌15min.临用时无菌分装每瓶mL.注:本培养基供沙门氏菌前增菌用.

37氯化镁孔雀绿增菌液(MM)甲液胰蛋白胨5g氯化钠8g磷酸二氢钾1.6g蒸馏水mL乙液氯化镁(化学纯)40g蒸馏水mL4.13.3丙液0.4%孔雀绿水溶液.制法:分别按上述成分配好后,℃高压灭菌15min备用.临用时取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以无菌操作混合即可.注:本培养基亦称Rappaport10(R10)增菌液.

38四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB)基础培养基多胨或眎胨5g胆盐1g碳酸钙10g硫代硫酸钠30g蒸馏水mL碘溶液碘6g碘化钾5g蒸馏水20mL制法:将基础培养基的各成分加入蒸馏水中,加热溶解,分装每瓶mL.分装时应随时振摇,使其中的碳酸钙混匀.℃高压灭菌15min备用.临用时每mL基础培养基中加入碘溶液2mL,0.1%煌绿溶液1mL.

39四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法)基础液:蛋白胨10g牛肉膏5g氯化钠3g碳酸钙45g蒸馏水mL将各成分加入于蒸馏水中,加热至约70℃溶解,校正pH至7.0±0.1,℃高压灭菌20min.硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)50g蒸馏水加至mL碘溶液碘片20g碘化钾25g蒸馏水加至mL将碘化钾充分溶解于是少量的蒸馏水中,加入碘片,振摇玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸馏水至规定量.贮于棕色玻瓶内,紧塞瓶盖备用.煌绿水溶液煌绿0.5g蒸馏水mL存放暗处,不少于1d,使其自然灭菌.牛胆盐溶液干燥的牛胆盐10g蒸馏水mL煮沸溶解,℃高压灭菌20min.制备:基础液mL硫代硫酸钠溶液mL碘液20mL煌绿溶液2mL牛胆盐溶液50mL临用前,按上列顺序,以无菌操作依次加入于基础液中,每加入一种成分,均应摇匀后再加入另一种成分.分装于灭菌瓶中,每瓶mL.

40亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)成分:蛋白胨5g乳糖4g亚硒酸氢钠4g磷酸氢二钠5.5g磷酸二氢钾4.58L-胱氨酸0.01g蒸馏水mL1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法:称取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g),加1mol/L氢氧化钠1.5mL,使溶解,再加入蒸馏水8.5mL即成.制法:将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于mL蒸馏水中,加热煮沸,俟冷备用.另将亚硒酸氢钠溶解于mL蒸馏水中,加热煮沸,候冷,以无菌操作与上液混合.再加入1%L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL.分装于灭菌瓶中,每瓶mL,pH应为7.0±0.1.

41GN增菌液成分:胰蛋白胨20g葡萄糖1g甘露醇2g柠檬酸钠5g去氧胆酸钠0.5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾1.5g氯化钠5g蒸馏水mLpH7.0制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH.分装每瓶mL,℃高压灭菌15min.

42肠道菌增菌肉汤成分:蛋白胨g葡萄糖5g牛胆盐20g磷酸氢二钠8g磷酸二氢钾2g煌绿0.g蒸馏水mLpH7.2制法:按上述成分配好,加热使溶解,校正pH.分装每瓶30mL,℃高压灭菌15min.

43亚硫酸铋琼脂(BS)成分:蛋白胨10g牛肉膏5g葡萄糖5g硫酸亚铁0.3g磷酸氢二钠4g煌绿0.g柠檬酸铋铵2g亚硫酸钠6g琼脂18～20g蒸馏水mLpH7.5制法:1将前面5种成分溶解于mL蒸馏水中.2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解.3将琼脂于mL蒸馏水中煮沸溶解,冷至80℃4将以上三液合并,补充蒸馏水至mL,校正pH,加0.5%煌绿水溶液5mL,摇匀.冷至50～55℃,倾注平皿.注:此培养基不需高压灭菌.制备过程不宜过分加热.以免降低其选择性.应在临用前一天制备,贮存于室温暗处.超过48h不宜使用.

44DHL琼脂成分:蛋白胨20g牛肉膏3g乳糖10g蔗糖10g去氧胆酸钠1g硫代硫酸钠2.3g柠檬酸钠1g柠檬酸铁铵1g中性红0.03g琼脂18～20g蒸馏水mLpH7.3制法:将除中性红和琼脂以外的成分溶解于mL蒸馏水中,校正pH.再将琼脂于mL蒸馏水中煮沸溶解,两液合并,并加入0.5%中性红水溶液6mL,待冷至50～55℃,倾注平板.

45HE琼脂成分:脙胨12g牛肉膏3g乳糖12g蔗糖12g水杨素2g胆盐20g氯化钠5g琼脂18～20g蒸馏水mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mLAndrade指示剂20mL甲液20mL乙液20mLpH7.5制法:将前面七种成分溶解于mL蒸馏水内作为基础液;将琼脂加入于mL蒸馏水内,加热溶解.加入甲液和乙液于基础液内,校正pH.再加入指示剂,并与琼脂液合并,待冷至50～55℃,倾注平板.注:①此培养基不可高压灭菌.②甲液的配制硫代硫酸钠34g柠檬酸铁铵4g蒸馏水mL②乙液的配制去氧胆酸钠10g蒸馏水mL②Andrade指示剂酸性复红0.5g1mol/L氢氧化钠溶液16mL蒸馏水mL将复红溶解于蒸馏水中,加入氢氧化钠溶液.数小时后如复红褪色不全,再加氢氧化钠溶液1～2mL.46SS琼脂基础培养基:牛肉膏5g眎胨5g三号胆盐3.5g琼脂17g蒸馏水mL再将两液混合,℃高压灭菌15min,保存备用.完全培养基:基础培养基mL乳糖10g柠檬酸钠8.5g硫代硫酸钠8.5g10%柠檬酸铁溶液10mL1%中性红溶液2.5mL0.1%煌绿溶液0.33mL加热溶化基础培养基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均匀,校正至pH7.0,加入中性红和煌绿溶液,倾注平板.注:①制好的培养基宜当日使用,或保存于冰箱内于48h内使用.②煌绿溶液配好后应在10d以内使用.③可以购用SS琼脂的干燥培养基.

47WS琼脂成分:②胨12g牛肉膏3g氯化钠5g乳糖12g蔗糖12g十二烷基硫酸钠2g琼脂15gAndrade指示剂20mL0.4%溴麝香草酚蓝溶液16mL甲液20mL蒸馏水mLpH7.0制法:除指示剂和甲液外,将其他成分加热溶解,不需消毒,校正pH后加入指示剂和甲液,倾注平板应呈草绿色.注:①供沙门氏菌分离用.②Andrade指示剂和甲液的配制均见HE琼脂.

48麦康凯琼脂成分:蛋白胨17g眎胨3g猪胆盐(或牛,羊胆盐)5g氯化钠5g琼脂17g蒸馏水mL乳糖10g0.01%结晶紫水溶液10mL0.5%中性红水溶液5mL制法:1将蛋白胨,眎,胆盐和氯化钠溶解于mL蒸馏水中,校正pH7.2.将琼脂加入mL加热溶解.将两液合并,分装于烧瓶内,℃高压灭菌15min备用.2临用时加热溶化琼脂,趁热加入乳糖,冷至50～55℃时,加入结晶紫和中性红水溶液,摇匀后倾注平板.注:结晶紫及中性红水溶液配好后须经高压灭菌.49伊红美蓝琼脂(EMB)成分:蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂17g2%伊红Y溶液20mL0.65%美蓝溶液10mL蒸馏水mLpH7.1制法:将蛋白胨,磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中,校正pH,分装于烧瓶内,℃高压灭菌15min备用.临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50～55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板.

50三糖铁琼脂(TSI)成分:蛋白胨20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁铵〔Fe(NH4)2(SO4)2·6H2O〕0.2g硫代硫酸钠0.2g琼脂12g酚红0.g蒸馏水mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用.

51三糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨15g眎胨5g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g琼脂12g酚红0.g蒸馏水mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到较高的底层.℃高压灭菌15min,放置高层斜面备用.

52克氏双糖铁琼脂(KI)上层培养基成分血消化汤(pH7.6)mL琼脂6.5g硫代硫酸钠0.1g硫酸亚铁铵0.1g乳糖5g0.2%酚红溶液5mL下层培养基成分血消化汤(pH7.6)mL琼脂2g葡萄糖1g0.2%酚红溶液5mL制法:1取血消化汤按上层和下层的琼脂用量,分别加入琼脂,加热溶解.2分别加入其他各种成分.将上层培养基分装于烧瓶内;将下层培养基分装于灭菌12mm×mm试管内,每管约2mL.℃高压灭菌10min.3将上层培养基放在56℃水浴箱内保温;将下层培养基直立放在室温内,使其凝固.4当下层培养基凝固后,以无菌手续将上层培养基分装于下层培养基的上面,每管约1.5mL,放成斜面.

53克氏双糖铁琼脂(换用方法)成分:蛋白胨20g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g葡萄糖1g氯化钠5g柠檬酸铁铵0.5g硫代硫酸钠0.5g琼脂12g酚红0.g蒸馏水mLpH7.4制法:将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热煮沸,以溶化琼脂.加入0.2%酚红水溶液12.5mL,摇匀.分装试管,装量宜多些,以便得到比较高的底层.℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用.

54葡萄糖半固体发酵管成分:蛋白胨1g牛肉膏0.3g氯化钠0.5g1.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1mL葡萄糖1g琼脂0.3g蒸馏水mLpH7.4制法:将蛋白胨,牛肉膏和氯化钠加入于水中,校正pH后加入琼脂加热溶解,再加入指示剂和葡萄糖,分装小试管,灭菌℃15min.

%乳糖发酵管成分:蛋白胨0.2g氯化钠0.5g乳糖5g2%溴麝香草酚蓝水溶液1.2mL蒸馏水mLpH7.4制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸馏水内,校正pH.将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内,分别灭菌℃15min,将两液混合,以无菌操作分装于灭菌小试管内.注:在此培养基内,大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于1d内发酵.

56CAYE培养基此培养基附在肠毒素诊断试剂盒内,如无此培养基,亦可用Honda氏产毒肉汤.

57Honda氏产毒肉汤成分:水解酪蛋白20g酵母浸膏粉10g氯化钠2.5g磷酸氢二钠15g葡萄糖5g微量元素0.5mL蒸馏水mLpH7.5制法:溶解后校正pH,高压灭菌℃15min,待冷至45～50℃时,加入林可霉素溶液,每毫升培养基内含90μg.微量元素配方:硫酸镁5g,氯化铁0.5g,氯化钻2g,蒸馏水mL

58Elek氏培养基(毒素测定用)成分:胨20g麦芽糖3g乳糖0.7g氯化钠5g琼脂15g40%氢氧化钠溶液1.5mL蒸馏水mLpH7.8制法:用mL蒸馏水溶解琼脂以外的成分,煮沸,并用滤纸过滤.用1mo1/L氢氧化钠校正pH.用另外mL蒸馏水加热溶解琼脂.将两液混合,分装试管10mL或20mL.℃高压灭菌15min.临用时加热溶化琼脂倾注平板.

59氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基成分:甲液:胰蛋白胨10g蒸馏水mL乙液:磷酸氢二钠9.5g蒸馏水mL丙液:氯化镁(MgCl2·6H2O)40g蒸馏水mL以上分别在℃灭菌15min.丁液:孔雀绿0.2g蒸馏水mL戊液:羧苄青霉素1mg/mL制法:取甲液mL,乙液mL,丙液mL混合,再加入丁液6.4mL和戊液2.4mL,即为mL培养基.分装灭菌烧瓶,每瓶mL,或灭菌试管10mL.

60胰蛋白胨水成分:胰蛋白胨10g蒸馏水mLpH7.0制法:将上述成分溶解,校正pH.分装试管,℃高压灭菌15min.

61Rustigian氏尿素培养液成分:尿素20.0g酵母浸膏0.1g磷酸二氢钾(KH2PO4)0.g磷酸氢二钠(Na2HPO4)0.g酚红0.01g蒸馏水mL制法:将上述成分:于蒸馏水中溶解,校正pH为6.8±0.2.不要加热,过滤除菌,无菌分装于灭菌小试管中,每管为约3mL.用途:尿素酶试验用.

62氯化钠结晶紫增菌液

成分:蛋白胨20g氯化钠40g0.01%结晶紫溶液5mL蒸馏水mLpH9.0制法:除结晶紫外,其他按上述成分:配好,加热溶解.约加30%氢氧化钾溶液4.5mL,校正pH.加热煮沸,过滤.再加入结晶紫溶液,混合后分装试管.℃高压灭菌15min.

63氯化钠蔗糖琼脂成分:蛋白胨10g牛肉膏10g氯化钠50g蔗糖10g琼脂18g0.2%溴麝香草酚蓝溶液20mL蒸馏水mLpH7.8制法:将牛肉膏,蛋白胨及氯化钠溶解于蒸馏水中,校正pH.加入琼脂,加热溶解,过滤.加入指示剂,分装烧瓶mL.℃高压灭菌15min备用.临用前在mL培养基内加入蔗糖1g,加热溶化并冷至50℃,倾注平板.

64嗜盐菌选择性琼脂成分:蛋白胨20g氯化钠40g琼脂17g0.01%结晶紫溶液5mL蒸馏水mLpH8.7制法:除结晶紫和琼脂外,其他按上述成分配好,校正pH.加入琼脂,加热溶解.再加入结晶紫溶液,分装烧瓶,每瓶mL.

.5%氯化钠三糖铁琼脂成分:三糖铁琼脂mL氯化钠30g制法:按前面三糖铁琼脂,再加入氯化钠30g,分装试管,℃高压灭菌15min.放置高层斜面备用.

66氯化钠血琼脂成分:酵母膏3g蛋白胨10g氯化钠70g磷酸氢二钠5g甘露醇10g结晶紫0.g琼脂15g蒸馏水mL制法:调pH8.0加热30min(不必高压),待冷至45℃左右时,加入新鲜人或兔血(5%～10%)混合均匀,倾注平皿.

.5%氯化钠生化试验培养基成分及制法:根据所需糖的种类按3.2配制.只是将氯化钠含量改为3.5%,pH为7.7.

68改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用)成分:磷酸氢二钠(Na2HPO48.23g磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)1.2g氯化钠(NaCl)5.0g三号胆盐1.5g山梨醇20g制法:将磷酸盐及氯化钠溶于蒸馏水中,再加入三号胆盐及山梨醇,溶解后校正pH为7.6,分装试管,于℃高压灭菌15min,备用.

69CIN-1培养基基础培养基胰胨20.0g酵母浸膏2.0g甘露醇20.0g氯化钠1.0g去氧胆酸钠2.0g硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.01g琼脂12.0g蒸馏水mLpH7.5±0.1将基础培养基高压灭菌.Irgasan以95%的乙醇作溶剂,溶解二苯醚,配成0.4%的溶液,待基础液冷至80℃时,加入1mL混匀.冷至50℃时,加入:中性红(3mg/mL)10.0mL结晶紫(0.1mg/mL)10.0mL头孢菌素(1.5mg/mL)10.0mL新生霉素(0.25mg/mL)10.0mL最后不断搅拌着加入10.0mL的10%氯化锶,倒平皿.

70嗜盐性试验培养基成分:蛋白胨2g氯化钠按不同量加蒸馏水mLpH7.7制法:配制2%蛋白胨水,校正pH,共配制5瓶,每瓶mL.每瓶分别加入不同量的氯化钠:(1)不加;(2)3g;(3)7g;(4)9g;(5)11g.待溶解后分装试管.℃高压灭菌15min.

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